ПроФЛОК® HEV-T Ab (ProFLOK® HEV-T Ab)

Набор для выявления антител против геморрагического энтерита индеек (HEV).

Набор предназначен для:

• серологического контроля за распространением возбудителя HEV в индейководческих хозяйствах;
• оценки эффективности иммунизации поголовья против данного заболевания.

Для исследования в лабораторию доставляют индивидуальные пробы сыворотки крови индеек без признаков гемолиза, полученные не менее чем от 30 голов обследуемой партии с интервалом каждые 4 недели. Допускается хранение проб сыворотки крови при температуре 4°С не более 4-х дней и при температуре минус 20°С - до момента исследования. Для постановки ИФА используют: одно- и многоканальные автоматические микропипетки со сменными наконечниками разных объемов, мерную лабораторную посуду, пробирки (планшеты) для разведения образцов, дистиллированную или деионизированную воду, автоматическое (ручное) промывочное устройство (вошер), спектрофотометр (ридер) с фильтром 405-410 нм. Необходимо помнить, что иммуноферментный анализ является высокочувствительным методом, поэтому ошибки, связанные с чистотой лабораторной посуды, подготовкой образцов, проведением инкубационного, температурного и промывочного режимов могут быть причиной получения недостоверных результатов.

Приготовление рабочих растворов. Перед началом работы все компоненты набора выдерживают 30 мин при комнатной температуре (20-24°С).

Промывочный буфер. Концентрированный буферный раствор для межэтапной промывки планшетов разводят в 20 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 400 см³ буфера к 20 см³ концентрата добавляют 380 см³ воды). Расход на 1 планшет - 400 см³.

Раствор конъюгата. Антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против IgG индеек разводят в 100 раз буфером для разведения и тщательно перемешивают (например, для получения 10 см3 раствора коньюгата к 0,1 см³ добавляют 10 см³ буферного раствора для разведения). Расход на 1 планшет –10 см³.

"Стоп-раствор". Концентрированный "стоп-раствор" разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 12,5 см3 «стоп-раствора» к 2,5 см³ добавляют 10 см³ воды). Расход на 1 планшет – 12,5 см³. Внимание! При хранении «стоп-раствора» при температуре от 2°С до 7°С допускается выпадение белого хлопьевидного осадка, исчезающего после прогревания при температуре 37°С в течение 15 мин.

Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Для подготовки контрольных и испытуемых проб сыворотки крови используют чистый, несенсибилизированный антигенами планшет, в лунки которого вносят по 300 мкл буфера для разведения. Затем в лунки А2, Н10 и Н12 добавляют по 6 мкл отрицательного контроля (разведение 1:50), в остальные (кроме А1, А3 и Н11) – по 6 мкл испытуемых сывороток (разведение 1:50), используя для каждой новый наконечник. Трижды пипетируют или выдерживают 5 мин при комнатной температуре для однородного распределения антител. Допускается хранение подготовленных проб в течение 24 часов при температуре (2-7)ºС. Подготовку положительного контроля проводят в отдельных чистых пробирках объемом 5 см³, добавляя к 300 мкл буфера для разведения 6 мкл специфической к HEV сыворотки (разведение 1:50).

Постановка реакции. Из пакета извлекают планшет, сенсибилизированный антигеном HEV, во все лунки которого вносят по 50 мкл буфера для разведений. Затем, с помощью 8-ми или 12-ти канальной пипетки в соответствующие лунки незамедлительно переносят по 50 мкл предварительно разведенных проб (разведение 1:100). В лунки А1, А3 и Н11 вносят по 50 мкл положительного контроля (разведение 1:100). Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 мин при комнатной температуре (21-24°С), после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают с помощью многоканальной пипетки или автоматического (ручного) промывочного устройства, наливая каждый раз в лунки по 300 мкл промывочного буфера, выдерживая по 3 мин с периодическим покачиванием. Затем жидкость окончательно удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге. Во все лунки планшета, используемые при постановке реакции, вносят по 100 мкл раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 мин при комнатной температуре (21-24°С). Повторяют процедуру промывания. Во все лунки планшета, используемые при постановке реакции, вносят по 100 мкл раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 15 мин при комнатной температуре (21-24°С). Реакцию останавливают добавлением в каждую лунку по 0,1 см³ подготовленного стоп-раствора.

Работу с исследуемыми сыворотками необходимо проводить с соблюдением правил техники безопасности при работе с биологическим материалом. Запрещается принимать пищу и воду в помещении, где проводятся работы с использованием данного набора. При попадании химических компонентов набора на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды. Набор следует хранить в местах, недоступных для детей.

диагностический набор. 

В состав набора входят иммунологические и химические компоненты.

Иммунологические компоненты:

•  планшет полистироловый с сорбированным в лунках афинно-очищенным гексоновым белком HEV – 10 штук;
• отрицательный контроль – сыворотка крови индеек, не содержащая антител к HEV, объем 0,2 см³ – 1 флакон;
• положительный контроль – сыворотка крови индеек, содержащая антитела к HEV, объем 0,2 см³ – 1 флакон;
• антивидовой иммунопероксидазный конъюгат против IgG индеек (H+L), объем 1,7 см³ – 1 флакон.

Химические компоненты:

• буферный раствор для разведения контрольных сывороток, испытуемых проб и антивидового иммунопероксидазного конъюгата, объем 200,0 см³ – 2 флакона;
• буферный раствор (20-ти кратно концентрированный) для межэтапной промывки планшетов, объем 200,0 см³ – 1 флакон;
• субстрат – раствор АБТС (2,2’-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота), содержащий перекись водорода, объем 100,0 см³ – 1 флакон;
• “стоп-раствор” (5-ти кратно концентрированный) – 5% раствор додецилсульфата натрия, объем 25,0 см³ – 1 флакон.