ПроФЛОК® IBD Ab (ProFLOK® IBD Ab)

Набор для выявления антител против вируса инфекционной бурсальной болезни кур (ИББ) иммуноферментным методом.

Набор предназначен для выявления специфических гуморальных антител к вирусу инфекционной бурсальной болезни птиц (ИББ) иммуноферментным методом (ИФА).

Для исследования используют индивидуальные сыворотки крови птиц без признаков гемолиза объемом 0,3-0,5 см³ в количестве не менее, чем от 30 голов обследуемой партии. Сыворотки можно хранить при температуре 4°С не более 4-х дней, и при температуре минус 20°С в течение 50-60 дней. Для постановки иммуноферментного анализа необходимы одно- и многоканальные автоматические микропипетки со сменными наконечниками разных объемов, мерная лабораторная посуда, пробирки для разведения образцов, дистиллированная или деионизированная вода, спектрофотометр (ридер) с фильтрами на 405-410 нм.

Приготовление рабочих растворов. Перед началом работы все компоненты набора выдерживают 30 мин при комнатной температуре (20-24°С).

• Буферный раствор для промывки. Концентрированный буферный раствор для промывки разводят в 20 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 400 см³ буферного раствора к 20 см³ концентрата добавляют 380 см³ воды). Расход на 1 планшет - 400 см³.
• Рабочий раствор конъюгата. Основной раствор конъюгата разводят в 100 раз буферным раствором для разведения проб и тщательно перемешивают (например, для получения 10 см³ рабочего раствора добавляют 0,1 см³ основного раствора к 10 см³ буферного раствора для разведения). Расход на 1 планшет – 10 см³.
• "Стоп-раствор". Концентрированный "стоп-раствор" разводят в 5 раз дистиллированной или деионизированной водой и тщательно перемешивают (например, для получения 12,5 см³ «стоп-раствора» к 2,5 см³ добавляют 10 см³ воды). Расход на 1 планшет - 12,5 см³. Внимание! Если при хранении 5 -кратного раствора образовался осадок, раствор необходимо прогреть при комнатной температуре или при температуре 37°С до полного растворения осадка.

Разведение испытуемых и контрольных сывороток. Все сыворотки разводят 1:100 буферным раствором для разведения проб, используя для каждой новый наконечник. Трижды пипетируют.

Постановка реакции.

• Из комплекта набора берут планшет, сенсибилизированный антигеном вируса ИББ.
• В лунки А1-А2 вносят по 0,1 см³ подготовленного отрицательного контроля.
• В лунки АЗ-А4 вносят по 0,1 см³ подготовленного положительного контроля.
• В остальные лунки планшета, начиная с А5, вносят по 0,1 см³ испытуемых проб сыворотки крови. Планшет накрывают крышкой и выдерживают 30 мин при комнатной температуре (20-24°С), после чего лунки освобождают от содержимого резким встряхиванием и трижды промывают трижды промывают буферным раствором для промывки (по 0,3 см3 на лунку), каждый раз выдерживая по 3-5 мин с периодическим покачиванием. Затем жидкость удаляют и планшет подсушивают постукиванием по сложенной в несколько слоев фильтровальной бумаге.
• Во все лунки планшета, используемые при постановке реакции, вносят по 0,1 см³ рабочего раствора конъюгата, накрывают крышкой и выдерживают 30 мин при комнатной температуре (20-24°С). Трижды повторяют процедуру промывания.
• Во все лунки планшета, используемые при постановке реакции, вносят по 0,1 см³ раствора субстрата, накрывают крышкой и выдерживают 15 мин при комнатной температуре (20-24°С).
• Реакцию останавливают добавлением в каждую используемую лунку по 0,1 см³ подготовленного стоп-раствора.

Работу с исследуемыми сыворотками необходимо проводить с соблюдением правил техники безопасности при работе с биологическим материалом. Запрещается принимать пищу и воду в помещении, где проводятся работы с использованием данного набора. При попадании химических компонентов набора на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промывать пораженное место большим количеством водопроводной воды. Набор следует хранить в местах, недоступных для детей.

диагностический набор включает следующие компоненты:

• полистироловые 96-луночные планшеты с адсорбированными в лунках инактивированным антигеном ИББ - 5 планшетов;
• положительный контроль - специфическая сыворотка к вирусу ИББ, 0,1 см³ - 1 флакон;
• отрицательный контроль - нормальная куриная сыворотка, 0,1 см³ - 1 флакон;
• антикуриный пероксидазный конъюгат против IgG кур, 1,0 см³- 1 флакон;
• раствор субстрата - АБТС (2,2'-азино-ди[3-этил]бензтиазолинсульфоновая кислота) с перекисью водорода, 100 см³ - 1 флакон;
• буферный раствор для разведения испытуемых проб, контрольных сывороток и конъюгата, 200 см³ - 2 флакона;
• концентрированный 20-кратный буферный раствор для промывки - 100 см³ - 1 флакон;
• концентрированный 5-кратный "стоп-раствор" (раствор, останавливающий развитие окраски) - 5% раствор додецилсульфата натрия, 25 см³ - 1 флакон.